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简单介绍流式细胞仪 049

楼主:森树白云2017-03-21 03:00 只看楼主

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导读:流式细胞仪就是进行流式细胞分析的仪器,它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体,是一种非常先进的检测仪器,被誉为试验室的“CT”。
           
  
  流式细胞术(Flow CytoMeter, FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统的荧光镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术。
  工作原理
  将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室,不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出,鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度,这样,鞘液就能够包绕着样品高速流动,组成一个圆形的流束,待测细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过检测区域。
  流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下,产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。
  这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理,将分析结果显示在计算机屏幕上,液可以打印出来,还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
  检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达,其X轴为测量强度,Y轴为细胞数目。一般来说,流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数,这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据,既可以单独显示每个参数的直方图,也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。
  细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷,当液滴流经带有几千伏特的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不予充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。
  应用范围
  可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定,以及免疫学研究,并已开始用于细菌鉴定,病毒感染细胞的识别合爱滋病感染者T4、T8细胞的记数。
  自70年代以来,随着流式细胞技术水平的不断提高,其应用范围也日益广泛。流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。
  技术特点
  流式细胞仪作为一种最先进的细胞定量分析检测仪器,设计上采用了许多独特的技术,其中涉及到液流系统、光路系统、信号测量和细胞分选等4个方面。
  展望
  流式细胞仪从细胞技术开始发展到今天,60年代至70年代是其飞速发展时期,激光技术、喷射技术以及计算机的应用使流式细胞仪在原理和结构上形成了固定的模式。
  80年代则是流式细胞仪的商品化时期,这期间不断有新型号的仪器推出,在多参数检测技术上不断提高。
  进入90年代,随着微电子技术特别是计算机技术的发展,计算能力不断提高,流式细胞仪的功能也越来越强大。在数据管理、数据分析方面有了长足进步。但是,在技术原理和设计方面并没有突破性的进展。人们的注意力开始转向流式细胞仪的应用,新的荧光探针、新的荧光染料、新的染色方法不断推出,使流式细胞技术在新的细胞参数分析方面日益发展。
  从新推出的仪器看,流式细胞仪会在硬件上不断更新,采用更新的器件(入半导体激光、大规模集成电路),以实现小型化;用数字电路取代模拟电路,充分发挥微处理器的功能以实现简单化;在软件上提高数据自动分析能力,充分发挥图形界面的优点,使操作更加简便。



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作者:游客
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今日头条

  • 来源丨美中嘉和

    肿瘤良恶性和分期详解,这下不再困惑了!

    “肿瘤”“癌症”等字眼常常会让人感到恐惧,但很多人对于“肿瘤”并不了解,这便导致有些人在遇到肿瘤时,会被“自我诊断”“蒙蔽”双眼。

    在肿瘤的医学检查报告单上有很多的数值,这其中,肿瘤尺寸的数值给人的印象最直观,有些患者一看到肿瘤尺寸不由得就开始自我诊断了:“肿瘤这么大,一定是晚期了”“这么小的肿瘤,不会太糟糕吧”。

    肿瘤的大小,真的不是评判肿瘤的良恶的标准!

    一 肿瘤的良与恶

    病理诊断才是判断肿瘤良恶性的“金标准”。在临床上,精确判断肿瘤的良恶性以及肿瘤的分期,都要病理科医生通过分析肿瘤组织来进行判断,一般是通过手术前的穿刺、手术切除的肿块标本,结合免疫组化的指标,来判断肿瘤的良恶性。

    肿瘤的良恶性最主要是看肿瘤细胞的特性。在临床上,有个头很大的良性肿瘤,也有个头很小但病理特征却具有高度恶性的恶性肿瘤,这样的差异便是源于肿瘤细胞本身的特性。

    有的肿瘤虽然小,但“住在”里面的肿瘤细胞“侵略性”强,会在身体的其他地方“安营扎寨”,严重破坏人体组织,这种肿瘤往往都是恶性的,人们常说的“癌症”指的就是“恶性肿瘤”;

    还有一些肿瘤虽然个头很大,但“住在”里面的肿瘤细胞都性格温和,不善侵略,除了因为个头大会压迫或阻塞周围组织外,不会对其他组织造成更严重的伤害,这种肿瘤常被归为良性或者交界性。

    二 肿瘤的分期绝不是只看大小

    肿瘤分期通常是针对于恶性肿瘤(也就是人们俗称的“癌症”),它为医生提供了了解肿瘤情况、进行肿瘤治疗的重要依据。

    肿瘤的分期不能只靠大小,那靠什么呢?

    TNM分期系统!这是目前国际上最通用的分期系统了。

    字母T :指肿瘤原发灶的情况,随着原发灶的肿瘤大小以及对周围组织影响的增加,依次用T1'T4来表示,T0表示没有证据说明存在原发肿瘤,Tis表示为原位癌、无浸润,Tx表示无法评估原发肿瘤状况;

    字母N:指区域淋巴结的受肿瘤细胞影响的情况。淋巴结未受影响时,用N0表示;随着淋巴结受影响程度和范围的增加,依次用N1'N3表示;淋巴结受影响状况无法评估时,用Nx表示;

    字母M:指肿瘤细胞远处转移的情况,没有远处转移的话就用M0表示,有远处转移则用M1表示。

    当T/N/M的情况确定以后,就可以对肿瘤进行分期啦,这个分期就就是人们常听到的I、II、III、IV期。在此基础上,肿瘤的分期还会被细化,所以大家还会看到IA、IIB等分期。

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    来看看肺癌的TNM分期

    人们还经常会说到肿瘤的早中晚期,一般来说分期越早即I期、II期代表肿瘤处于早期,肿瘤的情况尚且可控;III期、IV期则代表着肿瘤进入中晚期,此时肿瘤的治疗难度更大,预后也会较差。

    在一种情况下,肿瘤的大小可以用来对肿瘤进行分期。当肿瘤没有影响到区域淋巴结(N0),也没有“侵略”其他的组织(没有远处转移)(M0),此时肿瘤的体积越大(T1-T4),浸润周围脏器越多,分期就越晚。

    但如果肿瘤细胞“侵略”了其他组织(有远处转移)(M1),不论原发部位肿瘤的大小如何,都被定性为晚期。

    三 拓展:关于TNM

    TNM分期系统是目前国际上最为通用的肿瘤分期系统,也是临床上进行恶性肿瘤分期的标准方法。

    TNM分期方法由法国人Pierre Denoix最先在1943年至1952年间提出;

    随后,美国癌症联合委员会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)开始建立国际性的分期标准,1968年第1版《恶性肿瘤 INM分类法》手册正式出版。

    四 关于肿瘤分期的2个小问题

    肿瘤分期系统只有TNM吗?

    当然不是。

    有些肿瘤的生长方式和扩散方式不一样,是无法用TNM定义的。比如脑部和脊髓肿瘤、部分儿童肿瘤、霍奇金淋巴瘤和淋巴瘤以及血液系统其他肿瘤。

    此外,妇科肿瘤有FIGO分期,胸腺瘤有常用的Masaoka分期,肝癌有TNM分期、Okuda分期、巴塞罗那分期、中国分期(CS)等。

    同一名患者的肿瘤分期会变吗?

    一般不会。

    患者的肿瘤分期是指在初次诊断、治疗前的肿瘤分期,这个分期不会随着肿瘤的发展而改变。

    如果手术后病理结果显示分期有变化,则变动后的分期会显示为pTNM,之后也一直会以这一分期为准。

    在一些特殊情况下,医生会肿瘤进行再分期,如果您在TNM分期值前面看到字母“r”,这就是再次分期的结果啦。

    不能只看肿瘤的大小而做出任何判断。

    就如每当有切除十几斤大肿瘤的新闻出现时,医生更愿意想是良性的。因为长那么大才被发现,一方面说明生长缓慢,另一方面说明肿瘤对周围正常组织侵犯不严重,也没有广泛转移,这些都符合良性肿瘤的特征。

    而恶性肿瘤,即使还是个“小个子”,也能让人体表现出各种不适症状。

    早发现早治疗,切莫让“自我诊断”误病情,肿瘤固然可怕,但早已不是不治之症。

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